Как и где сделать анализ на отцовство


Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство



    Согласно проведенным исследованиям было установлено, что существует большая разница в реакции на лечение на рецепторы РЭФР между опухолями без мутации и опухолями, клетки которых несут мутации в KRAS. Проверка наличия мутации в онкогене KRAS помогает в решении, есть ли место для лекарственных препаратов, ингибиторов РЭФР, в случаях колоректального рака, после неудачи химиотерапии.
Так. Например, опубликованное в 2008 году исследование, в журнале под названием Clinical Journal of Oncology, еще раз доказало, что применение препарата Эрбитукс, при наличии мутации в онкогене KRAS, является неэффективным. Это является прогностическим показателем. В то же время лечение будет эффективным для больных колоректальным раком, с мутацией в РЭФР, но без мутации в онкогене KRAS.

     Проведенные исследования

     Исследование №1
     В настоящее время пациенты с колоректальным раком сразу после постановки врачом диагноза могут пройти специальный тест, определяющий статус онкогена KRAS. Это позволяет врачам выбрать оптимальное лечение и улучшить отдаленные результаты. У больных с диким типом онкогена KRAS при применении анти-РЭФР терапии может наблюдаться в первой линии лечения частота ответа 59% и снижение прогрессирования на 40%.     

     Такой факт имеет важное значение, так как во многих исследованиях была продемонстрирована целесообразность достижения высочайших показателей частоты ответа, потому как последняя коррелирует с большой вероятностью излечения и частотой резекции, в частности:
     В рандомизированном исследовании третьей фазы медиана ОВ в популяции больных, имеющих дикий тип онкогена KRAS и получающих Эрбитукс, а также химиотерапию FOLFIRI, составила 23 месяца по сравнению с 20 месяцев у пациентов, получающих только химиотерапию (p=0,0094; КР=0,796). Также в исследовании CRYSTAL было доказано снижение риска прогрессирования этого заболевания на 30 % при добавлении Эрбитукса к химиотерапии (p=0,0012; КР=0,696).
     Наблюдалось существенное увеличение ЧО до 58 % в группе, где применялась комбинация Эрбитукс и химиотерапии по сравнению с 40 % при использовании лишь химиотерапии (p<0,0001).
     В рандомизированном исследовании второй фазы медиана ОВ составила 22 месяцев у пациентов, имеющих дикий тип онкогена KRAS и получающих лечение Эрбитуксом в комбинации с химиотерапией, по сравнению с 18 месяцами у пациентов, получающих только химиотерапию (p=0,3854; КР=0,855).
     Кроме этого, при данном исследовании врачи наблюдали снижение риска прогрессирования КРР на 43,4% (p=0,0064;КР=0,567) у пациентов, получающих Эрбитукс вместе с химиотерапией, по сравнению с самой только химиотерапией в популяции пациентов, имеющих дикий тип онкогена KRAS.
     Также в исследовании было продемонстрировано увеличение частоты ответа на 67 % в группе применения препарата Эрбитукс и химиотерапии FOLFOX по сравнению с самой только химиотерапией у пациентов, имеющих дикий тип онкогена KRAS (ЧО – 57 % в противовес 34 %, p=0,0027).
    Все эти данные говорят о высокой эффективности Эрбитукса при добавлении его к химиотерапии в первой линии лечения КРР у пациентов, имеющих дикий тип онкогена KRAS, по сравнению с самой только химиотерапией.

     Исследование № 2

     Мутации онкоогена KRAS выявляют в 40 % случаев КРР. На сегодняшний день уже было описано свыше трех тысяч точечных мутаций гена в опухолевых клетках. Приблизительно 17% и 82% всех мутаций онкогена KRAS обнаруживают в кодонах 13 и 12 соответственно. Только 3% пациентов с наличием мутации онкогена KRAS в клетках опухоли отвечают на лечение анти-РЭФР, в то время как у больных, опухоли которых экспрессируют дикий тип онкогена, такой показатель достигает 33%. Поэтому определение статуса онкогена KRAS является ключевым моментом в прогнозе ответа на терапию цетуксимабом и панитумумабом. Врачи рекомендуют использование анти-РЭФР для лечения КРР исключительно пациентам без мутации онкогена KRAS.

     Цель исследования - определение частоты, а также спектра мутаций онкогена KRAS у людей, больных КРР.
     Объектом исследования были сто тридцать девять образцов опухолевой ткани больных КРР. В данное исследование, для исключения ошибки отбора, включили всех пациентов, направленных на тестирование статуса гена KRAS. Среди пациентов было 104 женщины и 35 мужчин, средний возраст которых составил 63 года.

     Врачи исследовали опухолевую ткань, которая была получена от пациентов при проведении хирургического вмешательства, фиксированную формалином и закрытую парафиновыми блоками. Затем парафиновые блоки нарезали с целью получения 3–6-серийных срезов толщиной 7 мкм и далее фиксировали на стеклах. Для патогистологической оценки и выявления зон локализации клеток опухоли один из срезов был окрашен гематоксилин-эозином. После депарафинизации в ксилоле осуществляли макро- или микродиссекцию 2–4-х срезов ткани с целью получения суспензии клеток, которая содержит не менее 72% опухолевых. ДНК выделяли при помощи наборов Nucleospin Tissue DNA Mini-Kit и QIAamp DNA minikit в строгом соответствии с рекомендациями данных немецких производителей. Статус онкогена KRAS изучали амплификацией мутантной последовательности ДНК вместе с супрессором нормальной аллели с маркировкой продукта цепной полимеразной реакции биотином c дальнейшей избирательной гибридизацией биотинилированного продукта на пробы стрип-теста (ViennaLab, KRAS StripAssay, Австрия) в строгом соответствии с рекомендациями производителя. Данный метод позволил определить мутации, которые локализированы в 12-м (р.Gly12Arg, р.Gly12Val, р.Gly12Leu, р.Gly12Ile, р.Gly12Asp, р.Gly12Ala, р.Gly12Cys, р.Gly12Ser) и 13-м (р.Gly13Cys, р.Gly13Asp) кодонах второго экзона гена KRAS.

     При помощи программного пакета под названием Statistica 5.5 (США) были проведены статистические расчеты. Данные оценивали с применением критерия Фишера в 2-х стороннем варианте. При р<0,05 разница между показателями оценивалась как значимая.

     Результаты

     Из ста тридцати девяти образцов опухоли статус онкогена KRAS (мутационный) удалось выявить в ста тридцати одном случае. В восьми случаях трехкратные попытки амплификации ДНК были безуспешны, что обусловлено с наибольшей вероятностью химической модификацией и деградацией ДНК опухолевых клеток во время гистологической проводки. Из сто тридцать одного случая, в которых выявление мутационного статуса онкогена KRAS оказалось возможным, наличие мутаций в 13-м и 12-м кодонах онкогена определено в 56 (примерно 43 %). В спектре уже определенных мутаций самой частой (36%, 20 из 56 пациентов с мутацией) оказалась замена в 12-м кодоне (р.Gly12Asp) глицина на аспартат. Затем, по частоте представления, расположились мутации таким образом: р.Gly12Val - 30,5% (17 из 56 пациентов с мутацией), р.Gly13Asp - 10,6% (6 из 56 пациентов), р.Gly12Ser — 8,8% (5 из 56 пациентов), р.Gly12Cys - 7,2% (4 из 56 пациентов), р.Gly12Ala - 5,3% (3 из 56 пациентов), р.Gly12Arg - 1,8% (1 из 56 пациентов). Также стоит отметить, что не были представлены (ни в одном из случаев) две или более мутаций одновременно.

    Обсуждение

     Таким образом, мутационный статус онкогена KRAS был определен у 139 больных КРР. Так как по данным опубликованных работ, 98–99% мутаций онкогена KRAS приходится на 12-й и 13-й кодоны, и только 2% мутаций - в 146-м и 61-м кодонах, мы ограничились исследованием самых частых аномалий.
Мутации онкогена KRAS были обнаружены в образцах у 56 из 131 больного (42,7%). Полученные данные полностью соответствуют другим результатам генотипирования, согласно которым частота мутаций онкогена KRAS находится в диапазоне 36–44%.
     По результатам проведенного исследования лидирующие позиции в спектре мутаций занимают р.Gly12Asp, р.Gly12Val, р.Gly13Asp. Хотя соотношения частот мутаций, по данным разных авторов, немного отличаются между собой, хотя особо значимых различий как по спектру между данными, так и по их частоте нет.
     В исследовании была выявлена связь между частотой мутаций в гене KRAS и полом больных КРР. Оказалось, что среди женщин уровень распространенности мутации онкогена KRAS выше, чем среди больных мужского пола (49%, 47 из 98 пациентов против 27 %, 10 из 33 пациентов соответственно). Все полученные результаты были полностью сопоставимы с данными Hong Shen исследования и его соавторов, которые определили мутации онкогена KRAS у женщин и мужчин, больных КРР, на уровне 44,6 и 28,3%. Однако, так как в крупном исследовании, которое включало 2721 пациента, не было установлено зависимости пола от частоты мутации онкогена, выявленные тенденции нужно проверить на большем объеме выборки.
     Полученные результаты исследования говорят о распространенности мутаций KRAS при КРР и подтверждают, что их спектр и частота в популяции больных КРР нашей страны никоим образом не отличаются от таковых среди больных этим заболеванием Китая и Западной Европы. Таки образом, определение статуса онкогена KRAS является ключевым моментом в прогнозировании ответа на терапию анти-РЭФР.

     Выводы

1. Данные о спектре и частоте мутаций онкогена KRAS у больных КРР в нашей стране не отличаются от других результатов генотипирования, полученных при исследованиях других зарубежных авторов.
2. Мутации онкогена KRAS в нашей стране встречаются реже у мужчин, чем у женщин.
3. В связи с непригодностью парафиновых блоков для исследований мутационного статуса онкогена рекомендовано соблюдать условия (при гистологической проводке образцов), дающие возможность проведения генетических тестов.
4. Рекомендовано использование препаратов-ингибиторов РЭФР для лечения опухолей, которые содержащих онкоген KRAS дикого типа. Их хорошая переносимость, а также возможность контроля их побочных эффектов (кожных реакций и диареи) доказана в клинических исследованиях.


Источник: http://www.genomed.ru/kras/


Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Как и где сделать анализ на отцовство

Читать далее: